重要品系雌性动物突发死亡,或雌性不能生仔的遗传工程小鼠,或想测试雌鼠不能生育的原因等情况,我们都可以尝试卵巢移植的实验来解决。一般雌鼠死亡在几个小时内的品系都可以尝试。具体几个小时内,我们也需要继续整理更多数据确定。
卵巢移植的一般操作流程
将受体鼠的卵巢移除,将供体鼠的卵巢移入受体鼠的卵巢系膜中,卵巢系膜可以将供体鼠的卵巢固定在正确的位置上。在此之后,受体鼠与移植的卵巢会重新建立血液共给关系,并且卵巢会对垂体激素做出反应并排出成熟卵子。
在卵巢移植中需要注意的问题:
通常移植了卵巢的雌鼠在手术后3周再用于繁殖。
新生鼠卵巢可以移植到3周龄的受体鼠中,因为它的卵巢膜要比年龄大一些的小鼠的囊膜小,可以用玻璃细管将新生卵巢移入囊膜中。
将卵巢移入受体鼠后要一直等到受体鼠繁殖周龄时才可排卵,如果受体鼠不能分娩,则将移入的卵巢取出重新移入其他受体鼠中。
具体操作程序
处死或麻醉供体鼠并取出一侧或两侧卵巢。可以将取出的卵巢立即移植给受体鼠,也可以放入培养液或PBS中短暂停留。另外,解冻后的卵巢在手术前要将其在M2培养液中平衡至少10min。
麻醉受体鼠。
像胚胎移植一样用手术方法将卵巢与子宫暴露。
在输卵管开口处(输卵管伞部)的对侧用剪刀将卵巢膜剪一个小口。 注:卵巢膜的开口最好不要大过取出受体鼠卵巢所需的最小开口尺寸,这样移入的供体卵巢就可以被卵巢囊膜固定在适当的位置上。通过开口用眼科镊夹住卵巢,铰断连接卵巢的柄,将卵巢移出。这一操作可能会导致出血并流入卵巢囊膜。
用眼科镊将供体卵巢移入卵巢囊膜中。
将卵巢和子宫轻轻放回腹腔,用1-2针缝合体壁并用伤口夹合拢皮肤。
用手术法暴露受体鼠另一侧的卵巢和子宫,重复第4-6步。
因为每一个供体鼠有两个卵巢,最后的结果可以得到两只受体鼠。也可以将供体卵巢切成小块移入额外的受体鼠中。