关键词:外来小鼠 加快净化 方案选择

        如上文中提到了“生物净化的目的、净化方式、如何申请和动物的要求是什么?”,但在实际操作中,经常会出现净化方案选择错误的情况,导致净化时间过长。         净化方案第一考虑因素是后代用于什么目的,然后根据小鼠雌雄数量、Genotype来决定净化方式。现举例说明:

一、 xxx-Cre或xxx-KO小鼠(包括CreERT2类小鼠需要净化): 1. 后代需要heter:     1) 欲净化小鼠只有♂:         a) 1-2只:保险起见,建议和B6或xxx-flox等品系交配净化。         b) 3只及以上:杀1♂直接做IVF净化最快捷,相当于一次IVF扩繁。卵子来源可以同时是B6或xxx-flox等品系。     2) 欲净化小鼠只有♀:         a) 1-2只:保险起见,建议和B6或xxx-flox等品系繁殖后,再根据后代性别和Genotype选择净化方案。         b) 3只及以上:超排1-3♀,和B6交配净化。但只杀1见栓♀取胚胎,做胚胎移植。其余继续交配繁殖。     3) 欲净化小鼠♀和♂都有:         因为要的后代是heter,可以单独超排♀和B6或xxx-flox等品系交配净化,或者杀1-2只♂做IVF净化,相当于一次IVF扩繁

2. 后代需要xxx-Cre homo:     1) 欲净化小鼠只有♂或♀单一性别:无法做到后代中有homo。     2) 欲净化小鼠♀和♂都有:         a) 1-2只♂,1-2只♀:保险起见,建议繁殖后再根据后代数量选择净化方式。♀超排年龄可以是3-5周龄,所以可以考虑♀和父代IVF或交配净化,节约3-5周等待交配繁殖时间。         b) ♂数量为1-2只,3-4只及以上♀:超排1-3♀,品系内交配净化。♀≥5只,可以考虑做IVF净化。

二、 xxx-flox(包括CKI类小鼠需要净化):     无论后代要求是heter还是homo,都推荐直接和B6或xxx-Cre等品系IVF净化,得到大量净化后的heter后再品系内交配得到homo,或者和xxx-Cre交配繁殖。     为了交配成homo,然后再用homo小鼠去做净化是最不推荐的,也是最耽误时间的。请同学们考虑。 1. 欲净化小鼠只有♂:     1) 1-2只:保险起见,建议和B6或xxx-Cre等品系交配净化。     2) 3只及以上:杀1♂直接做IVF净化最快捷,相当于一次IVF扩繁。卵子来源可以同时是B6或xxx-flox或xxx-Cre等多个品系。

2. 欲净化小鼠只有♀:     1) 1-2只:保险起见,建议和B6或xxx-flox等品系繁殖后,再根据后代性别和Genotype选择净化方案。     2) 3只及以上:超排1-3♀,和B6或xxx-flox交配净化。但只杀1见栓♀取胚胎,做胚胎移植。其余继续交配繁殖。

三、 多个基因修饰小鼠     DKO,假如是double heter,homo不死亡,建议和B6或double heter做IVF净化,优先选择有一个基因是homo的小鼠。     TKO,也是类似策略。     建议多个基因修饰小鼠的复杂净化,和张静或者常在当面沟通。避免出现长时间无法净化的情况。

四、 注意事项:     1. 无论是交配净化还是IVF净化,所有用于超排的雌鼠♀,年龄要求不少于3只,年龄在3-5周或9周以上,避开6-8周龄激素不敏感期;雄鼠♂年龄最好在10周龄以上,8周龄可以尝试。     2. 向其他老师索求小鼠时,尽可能要3只雄鼠♂。     3. IVF净化时,尽可能考虑是否可以和IVF扩繁一并进行。IVF扩繁见链接:小鼠IVF快速大量扩繁服务优缺点介绍    4. 小鼠进入清华大学实验动物中心后,第一件事是做Genotyping,验证Genotyping方案可行,确保小鼠Genotype正确。     5. 建议多个基因修饰小鼠的复杂净化,和张静或者常在当面沟通。避免出现长时间无法净化的情况。