在组织学中，石蜡切片和冰冻切片都是常用的方法，前者常用于进行免疫组化实验，后者则常用于免疫荧光实验。今天，小编就来带大家一起了解一下石蜡切片与冰冻切片。
优缺点对比
| 石蜡切片 | 冰冻切片 |
| 优点：组织结构保存良好，能切连续薄片，组织结构清晰，抗原定位准确。可长期保存。 |
优点：能够较完好地保存多种抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。 |
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缺点：制片过程中要经过酒精、二甲苯等有机溶剂处理，组织内抗原活性失去较多。 |
缺点：组织易碎易烂，完整切片结构较难获取； 冰冻时，组织中水份易形成冰晶，往往影响抗原定位。 短期低温保存。 |
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解决方式：抗原热修复---柠檬酸盐缓冲液高温煮30min （有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等 样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果） |
解决方式：速冻------液氮 |
样本制备流程
| 石蜡切片 | 冰冻切片 |
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1.4%多聚甲醛4℃固定过夜； 2.1xPBS洗一次，30min； 3.30%乙醇1小时,摇床上慢摇，下同； 4.50%乙醇1小时； 5.70%乙醇1小时； 6.85%乙醇1小时； 7.95%乙醇1小时； 8.95%乙醇1小时； 9.正丁醇1小时（打开65℃温箱溶蜡）； 10.正丁醇1小时； 11.正丁醇1小时； 12.石蜡65℃中处理3小时，每隔1小时换石蜡一次，包埋。 |
1.4%多聚甲醛冰上固定2小时；
2.1xPBS洗一次，5min； 3.30%蔗糖沉降2小时； 4.OCT包埋。 |
常用固定液
不同的固定液对于固定不同的组织成分起着不同的作用，因此我们在使用时应该了解不同固定剂的效能，才能合理的固定组织。根据Bencroft的分类法，将不同的固定剂分为四种类型：
Ⅰ类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。
Ⅱ类：氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等。
Ⅲ类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等。
Ⅳ类：其他，氯化汞，苦味酸等。
上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛和多聚甲醛，其余的也在其它病理技术方面中用到。
甲醛与多聚甲醛固定的区别
（1）10%甲醛：对组织渗透性强，固定均匀。对组织膨胀约5%，经酒精脱水时有较大的收缩。能保存脂肪，不能沉淀核蛋白及白蛋白，长期用其固定的组织使组织变为酸性，不利于染色，特别是细胞核的着色。经自来水冲洗6~24小时后，可以使其酸碱中和，并减少结晶。
（2）4%多聚甲醛：对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保存较好，特别是对脂肪和各种酶的固定效果更好。固定的时间不宜太长，以24小时以内为宜，适用于免疫组织化学染色。
石蜡切片机与冰冻切片机
注意事项:
首先检查切片机各部位是否已固定，刀片是否锋利;
用切片机切片时注意速度，太快易出现褶皱，可以提前将样品置于冰上冷却；
切片时发现纵向刀痕立即停止切片，清除刀片上的杂质或碎屑；
展片水温控制在42℃左右，过高蜡片弥散，过低蜡片不能展开；
新换的水需要加热到42度才能将蜡片放入，否则水温上升后易出现微小气泡，影响贴片；
展片槽水位应较高，防止玻片触底带起气泡，贴附于蜡片下影响贴片；
展片时间过短则蜡片不能完全展开；
展片时间过长则蜡片弥散，不利于贴片；
可用普通载玻片；
切片样品置于切片盒中敞开晾干后室温保存。
冰冻切片机
注意事项:
样品提前两小时从-80℃放置-20℃稳定样品状态，平衡样品温度；
冰冻包埋OCT液于室温呈液态，-15℃以下呈固态；
载玻片应置于室温，若长时间置于-20℃则组织将不能贴附;
必须使用粘附性载玻片；
撰稿：金恒薇
编辑：立花树月
审核：羽茜
