一、哨兵鼠的品系和设立方法
1. 哨兵鼠选用动物中心防疫级别最高的饲养间——二期4056房间所生产的ICR小鼠,在4-6周龄时设置为哨兵鼠,可以避免打架。
2. 小鼠必须检测符合SPF级别方可作为哨兵鼠,并排除非国标SPF病原项目——阿米巴原虫、小鼠诺如病毒(MNV)、螺杆菌。
3. 哨兵鼠设置量及只数确定:根据每个饲养室笼架面数来确定该房间哨兵鼠的数量,每面8×10或9×9的IVC笼架设置1笼哨兵鼠。每个笼盒内2-3只,为同一性别,年龄4-6周。
4. 哨兵鼠笼设置位置:哨兵鼠一般放在笼架排风末端位置,信息牌里必须标记有“哨兵鼠”字样,写明性别、数量、出生日期、品系名称以及设立为哨兵鼠的日期。
5. 哨兵鼠设置时长:在设立为哨兵鼠后,为保障充分接触病原的机会和潜伏期,哨兵笼小鼠须在该面架子上至少持续生活8周接触脏垫料才可以进行质量检测。
送检的送检安排:
每季度将哨兵鼠编号后分为两批,分别送往北京维通利华检测室进行检测,对可疑结果进行复检。
检测报告的出具:
由于有送检,也有部分自检项目,动物中心会综合多次多个检测报告结果汇总到现在网上提供的《清华大学实验动物中心动物质量检测报告》,见链接“动物质量检测报告”。检测公司出具的原始检测报告可以向动物福利与质量保障平台主管索取。
二、检测项目的选择及目的
首先我们净化后房间(要求必须净化)的检测项目包括了所有中国国标小鼠SPF必检和必要时检测的所有项目,另外增加了国际上流行但中国国标不要求检测,还有一些可能对动物实验造成影响的其他项目,包括小鼠诺如病毒(MNV)、新生小鼠流行性腹泻病毒(EDIM)、小鼠肾细小病毒(MKPV)等病毒,多杀巴斯德杆菌、支气管鲍特杆菌等细菌,兔脑原虫、阿米巴原虫等寄生虫。
举例说明如下:
小鼠诺如病毒(MNV,Mouse Norovirus):现在美国和加拿大有20-35%的感染率(血清检测阳性),从我们进口的小鼠来看,远远大于20%。MNV-1感染Stat1,Stat1和Rag,Stat1和Pkr敲除小鼠可以致死。
新生小鼠流行性腹泻病毒(Epizootic Diarrhea of Infant Mice,EDIV):EDIV病毒具有高度传染性,并在实验和野生小鼠中普遍存在。但是临床易感的幼年小鼠由于有母源性的IgA,所以很有临床症状。通常,主要表型在2周龄内新生小鼠出现腹泻症状,但14-17日龄也基本上会恢复。BALB/c相对易感,B6相对抵抗。
小鼠肾细小病毒(Mouse kidney parvovirus, MKPV):MKPV可通过动物生物制品传播,例如细胞系、可移植肿瘤和血液制品,主要经粪-口或尿-口途径感染(Roediger B et al., 2018)。免疫功能正常的小鼠通常不会表现出明显的临床症状(Baze WB 等,2006),但在免疫缺陷小鼠中会导致严重的肾脏损伤,包括肾小管变性、间质纤维化、坏死,并发展为肾衰竭,4-5个月内可能死亡(Roediger B 等人,2018)。
兔脑原虫(Encephalitozoon cuniculi,ECUN):是人畜共患病,因为兔脑原虫主要感染部位是肾脏,然后迁移到脑部,在病理切片上表现为肉芽肿,干扰实验结果评估,另外动物感染后免疫功能低下。所有这些都会影响实验。
三、检测项目出现阳性后的处理方法
阳性的判定:
1. 若首次检测出现阳性,应在第一时间安排复检。
2. 若复检仍为阳性,需要在《实验动物质量检测报告》中注明本次阳性情况,包含阳性比例及具体排查说明。
3. 若复检转为阴性,则需提醒使用单位注意,并由中心将该项目的检测周期缩短为每两周或每月一次,同时增加抽检样本数量。
四、阳性结果的处理方式
1. 立即对阳性哨兵鼠实施安乐死,联系确认阳性动物处理方式,予以淘汰或转移至低级别房间。
2. 所在房间降级处理。工作人员不得从低级别的饲养间进入高级别饲养间。
3. 使用棉片法进行全笼架筛查。查时以品系为最小查单位合并样本,以便快速定位阳性来源,及时移出相关房间。
4. 阳性项目检测频率从每三个月调整为每个月或每两周一次。后续检测结果应更新到下一季度的检测报告中。
5. 在兽医指导下,对相关区域及设备进行针对性清洁与消毒,并更换IVC主机过滤器。
6. 假如动物需接受治疗,在治疗开始前及结束后,应对该笼架所有笼盒的全套笼具进行更换,包括底盒、网格、水瓶和上盖。治疗期间该面笼架应应尽量避免放置新的动物,以减少交叉风险。
7. 该面笼架应保持尽可能长的空置期,建议至少1个月时间。
8. 所有涉及问题笼架的操作,如换笼等均应安排在最后进行,待风险完全解除后再恢复正常流程。
